文献类型： 中文期刊
作者： 覃湘婕 1 ; 周宏专 2 ; 杨兵 2 ; 徐福洲 2 ; 薛静 2 ; 张晓东 2 ; 王金洛 2 ;
作者机构： 1.北京农学院动物科学技术学院
2.北京市农林科学院
关键词： 猪传染性胃肠炎病毒;转基因玉米;目的基因;DNA聚合酶;优化
期刊名称： 北京农学院学报
ISSN： 1002-3186
年卷期： 2014 年 29 卷 04 期
页码： 1-7
摘要： 为提高转基因玉米中目的基因的检出效率,以猪传染性胃肠炎病毒纤突糖蛋白(TGEV-S)转基因玉米为材料,利用PCR方法检测样品中的目的基因。通过对PCR反应体系中4种不同DNA聚合酶和8种退火温度进行比较,建立和优化了转基因玉米中TGEV-S基因的PCR检测方法。对450株转基因玉米叶片DNA和种子DNA中的TGEV-S基因片段进行检测,并设计33对引物检测插入转基因玉米基因组DNA中的质粒pBAC9020DNA片段。结果显示,LA Taq?酶对叶片DNA和种子DNA中TGEV-S片段的PCR扩增敏感性和特异性均优于其他Taq聚合酶,且退火温度为53~55℃时扩增效果较好。分别对450份转基因玉米叶片DNA和种子DNA检测结果显示阳性率分别为82.5%和76.3%。利用33对引物进行的PCR扩增及测序结果显示质粒pBAC9020基因片段已全部插入该玉米基因组DNA中。本试验建立的转TGEV-S基因玉米PCR检测方法敏感性和特异性高,为转基因玉米阳性植株的检测奠定了坚实的基础。
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