文献类型： 中文期刊
作者： 梁荣 1 ; 丁芳艺 1 ; 宋海鑫 1 ; 张金秋 1 ; 费荣梅 1 ;
作者机构： 1.南京农业大学动物医学院;江苏省农业科学院动物免疫工程研究所;江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心
关键词： 猪流行性腹泻病毒(PEDV);pro)','','NsIyoWyAoZYts39c;mmd2B5eYZ;mmd2BpJ13fCzfTgYDIxVTfuvEIL8lqUmtTTPAAoITOYXwLRIbc4qYmWZk58pYMOUOA1MQ=='); >3C样蛋白酶(3CLpro);真核表达;生物信息学
期刊名称： 畜牧与兽医
ISSN： 0529-5130
年卷期： 2020 年 009 期
页码： 80-87
收录情况： 北大核心
摘要： 3C样蛋白酶(3CLpro)是冠状病毒的主蛋白酶,在病毒复制及致病过程中发挥重要作用.本研究旨在对猪流行性腹泻病毒3C样蛋白酶(PEDV 3CLpro)进行真核表达,并对其结构和功能进行生物信息学分析.根据GenBank上PEDV 3CLpro基因的序列设计并合成特异性引物,通过RT-PCR方法进行3CLpro基因的扩增,亚克隆至pEGFP-N1真核表达载体中,并转染至HEK 293T细胞,通过荧光观察和Western blot鉴定该蛋白的表达.并利用生物信息学软件对3CLpro进行序列分析、结构和功能预测.结果显示:PEDV 3CLpro能够在真核细胞中稳定高效表达,大小约为43 kDa,共编码302个氨基酸,分子式为C1446H2250N400O437S15,亲水性平均系数为0.058,不稳定指数为33.19,含有丰富的糖基化位点及磷酸化位点.其二级结构包含20.53%的α螺旋、38.41%的β折叠以及41.06%的无规则卷曲,对应的2个催化位点分别为41位的组氨酸(His)和144位的半胱氨酸(Cys).上述结果为进一步研究PEDV 3CLpro在病毒与宿主互作中的生物学功能提供数据支撑.
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