文献类型： 中文期刊

作者： 贺永国 ¹ ; 李哲 ² ; 黄绵佳 ¹ ; 曾宪海 ² ; 林位夫 ² ; 刘洁琼 ² ; 张春红 ² ; 马晓晓 ³ ;

作者机构： 1.海南大学园艺园林学院

2.中国热带农业科学院橡胶研究所/农业部橡胶树生物学与遗传资源利用重点实验室

3.海南大学农学院

关键词： 橡胶树;乳管特异性启动子PHEV2.1;HbHMGR1基因;植物表达载体;构建;鉴定

期刊名称： 南方农业学报

ISSN： 2095-1191

年卷期： 2016 年 47 卷 02 期

页码： 163-168

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】克隆橡胶树乳管特异性强启动子HEV2.1(PHEV2.1),构建天然橡胶生物合成途径关键限速酶基因(Hb HMGR1)的乳管特异性植物表达载体,为橡胶树遗传转化奠定基础。【方法】根据已报道的HEV2.1序列(Gen Bank登录号AY247789.1)设计1对特异引物,采用PCR从橡胶树热研7-33-97基因组DNA中克隆PHEV2.1,与Hb HMGR1基因融合构建橡胶树乳管特异性植物表达载体,并以PCR和限制性内切酶酶切进行鉴定。【结果】用特异引物可从热研7-33-97基因组DNA中扩增获得1852 bp的PHEV2.1片段,其与AY247789.1启动子序列的同源性为98.6%。将PHEV2.1与Hb HMGR1基因融合构建乳管特异性植物表达载体p CAMBIA2301-PHEV2.1-Hb HMGR1,经PCR和限制性内切酶酶切鉴定证明植物表达载体构建成功。【结论】将PHEV2.1和Hb HMGR1基因先构建到p CAMBIA3301载体上再克隆至p CAMBIA2301载体上,能有效解决直接克隆至p CAMBIA2301载体上出现Pst I突变、阻碍载体构建的难题,成功构建获得乳管特异性植物表达载体p CAMBIA2301-PHEV2.1-Hb HMGR1。