文献类型： 中文期刊

作者： 刘运超 ¹ ; 陈玉梅 ¹ ; 冯丽丽 ¹ ; 汪磊 ¹ ; 王聚财 ¹ ; 陆东峰 ¹ ; 张改平 ¹ ;

作者机构： 1.河南省农业科学院动物免疫学重点实验室/农业部动物免疫学重点开放实验室;郑州大学生命科学学院;河南省农业科学院农业经济与信息研究所;河南花花牛实业总公司

关键词： 猪瘟病毒;E2蛋白;中和性单克隆抗体;抗体中和效价;免疫过氧化物酶单层细胞试验

期刊名称： 河南农业科学

ISSN： 1004-3268

年卷期： 2019 年 48 卷 12 期

页码： 114-120

收录情况： 北大核心

摘要： 为了获得具有中和活性的抗猪瘟病毒(CSFV)单克隆抗体,分别将CSFV和杆状病毒表达系统表达纯化的CSFV E2蛋白与佐剂混合后免疫BABL/c小鼠,经杂交瘤细胞融合制备抗CSFV单克隆抗体,经过多轮亚克隆和免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)筛选,成功获得5D1、8H7、9A1和13B2共4株能够稳定分泌抗CSFV单克隆抗体的杂交瘤细胞株。4株单克隆抗体轻链均属于κ型,其中5D1、8H7、13B2为IgG1亚型,9A1为IgG2c亚型。间接ELISA检测结果显示,4株单克隆抗体的腹水效价在2.56×10~5～1.02×10~6;IPMA效价分别为6.40×10~4、1.28×10~5、2.56×10~5、1.28×10~5;SDS-PAGE和Western blot检测结果显示,4株单克隆抗体均能与经原核表达系统及杆状病毒表达系统获得的CSFV E2蛋白发生特异性反应;IPMA检测结果显示,4株单克隆抗体均能与CSFV发生特异性反应,而与牛流行性腹泻病毒(BVDV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪圆环病毒(PCV2)均无交叉反应。病毒中和试验证实,单克隆抗体13B2具有中和活性,其中和效价为1.28×10~4。综上,成功筛选出4株能够分泌抗CSFV特异性抗体的杂交瘤细胞株,其中单克隆抗体13B2具有中和CSFV感染活性。