文献类型： 中文期刊

作者： 杨苏珍 ¹ ; 孙亚宁 ¹ ; 刘运超 ¹ ; 柴书军 ¹ ; 张改平 ² ;

作者机构： 1.河南省农业科学院

2.河南省农业科学院动物免疫学重点实验室

关键词： 口蹄疫病毒（FMDV）;抗体;试纸;优化

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2022 年 010 期

页码： 3953-3962

收录情况： 北大核心

摘要： 【目的】建立口蹄疫病毒（FMDV）感染与免疫鉴别诊断及免疫评价二联试纸稳定的生产工艺，促进其产业化生产及临床应用。【方法】本研究以胶体金免疫探针结合猪IgG,FMDV结构蛋白（SP）及非结构蛋白（NSP）的表位多肽偶联载体蛋白制备人工抗原，设置两条检测线精准拦截抗体的检测模式，以试纸条特异性及敏感性为评价指标，对胶体金免疫探针用蛋白、试纸拦截用多肽抗原、检测线位置及喷膜缓冲液、金标蛋白保存液、样品垫缓冲液以及样品稀释液等参数进行优化。采用优化后的试纸检测266份田间猪血清样品，并与口蹄疫O型抗体液相阻断ELISA检测试剂盒（LPB ELISA）和3ABC阻断ELISA抗体检测试剂盒（3ABC ELISA）检测结果进行对比，计算该试纸与商品ELISA试剂盒的符合率。【结果】经优化后，口蹄疫感染与免疫鉴别诊断及免疫评价二联试纸生产工艺参数如下：以胶体金标记金黄色葡萄球菌A蛋白（SPA）为免疫探针；选择混合多肽的形式设置拦截线，以非结构蛋白多肽（BSA-NSPs）喷涂T1线，结构蛋白多肽（BSA-SPs）喷涂T2线，以0.1 mol/L Tris-HCl为喷膜缓冲液；以ddH₂O含15 mg/mL BSA、13.25 mg/mL Na₂HPO₄·12H₂O、15.9 mg/mL NaH₂PO₄·2H₂O、10%Trition X-100和0.3 mg/mL NaN₃为金标蛋白保存液；以0.02 mol/L Na₂B₄O₇·10H₂O含10 mg/mL酪蛋白、5%Trition X-100、0.3 mg/mL NaN₃为样品垫缓冲液；以生理盐水含1.0%Tween-20为样品稀释溶液。制备的FMDV感染与免疫鉴别诊断及免疫评价二联试纸与3ABC阻断ELISA抗体检测试剂盒的符合率为96.20%,与口蹄疫O型抗体液相阻断ELISA检测试剂盒的符合率为94.36%。【结论】通过对试纸生产工艺的优化，建立了稳定的生产工艺，制备的二联试纸检测线显色清晰可见，肉眼识别度高，试纸的检测特异性和敏感性良好。本研究为该试纸的批量生产和产业化应用奠定了基础，为基层口蹄疫的检测提供了稳定、特异、敏感、准确的检测方法。