文献类型： 中文期刊

作者： 孙重霞 ¹ ; 杨凤萍 ² ; 张婷 ¹ ; 隋晓燕 ¹ ; 梁荣奇 ¹ ; LIU Qing ³ ; 张晓东 ² ; 李保云 ¹ ;

作者机构： 1.中国农业大学农学与生物技术学院/农业生物技术国家重点实验室/农业部作物基因组与遗传改良重点实验室/北京市作物遗传改良重点实验室

2.北京市农林科学院北京农业生物技术研究中心

3.Commonwealth

关键词： 小麦;多酚氧化酶(PPO);RNAi;白度

期刊名称： 中国农业科学

ISSN： 0578-1752

年卷期： 2013 年 46 卷 06 期

页码： 1104-1113

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】通过RNAi策略抑制小麦籽粒ppo的表达,获得籽粒PPO酶活性低、白度高的转基因小麦新种质。【方法】构建了以小麦胚乳特异表达启动子1Dx5启动子驱动的籽粒ppo的RNAi载体pBAC47P-ppoIR,利用基因枪将该载体与含bar的表达载体基因枪共转化中优9507幼胚愈伤组织,获得T0转基因植株。通过分子鉴定(PCR、Southern杂交、半定量RT-PCR、Northern杂交)、酶活筛选和白度测定等方法对转基因植株及其后代株系进行筛选。【结果】获得了27株阳性T0转基因植株。转基因植株及其后代经PCR和Southern杂交检测表明,RNAi构件已经稳定整合到T1的12个株系中。半定量RT-PCR和Northern杂交结果表明有20株T2籽粒中ppo表达水平明显低于对照。对转基因T2灌浆期籽粒进行PPO同功酶活性分析表明,有6个株系的PPO活性有所减弱。对T4籽粒的面片白度测定表明,5个株系的白度均比对照有所提高,其中2个株系效果显著。【结论】RNAi技术的表达能抑制籽粒ppo表达,降低PPO同功酶的活性,明显提高小麦面片白度,从而为小麦面粉白度的改良、品质育种提供了材料。