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信号肽对猪瘟病毒E2蛋白在杆状病毒表达系统中分泌表达的影响

文献类型： 中文期刊

作者： 魏蔷 1 ; 刘运超 1 ; 白怡霖 1 ; 冯华 1 ; 宋亚鹏 1 ; 张改平 1 ;

作者机构： 1.河南省农业科学院动物免疫学重点实验室/河南省动物免疫学重点实验室/农业部动物免疫学重点实验室;西北农林科技大学动物医学院;河南农业大学牧医工程学院;江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心

关键词： 信号肽;E2蛋白;猪瘟病毒(CSFV);分泌表达

期刊名称： 畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2020 年 01 期

页码： 120-127

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 旨在通过引入信号肽序列实现猪瘟病毒E2蛋白在杆状病毒表达系统中的高效表达。首先将内源信号肽(简称endo)、蜂素信号肽(简称mel)及gp67信号肽(简称gp67)分别引入pFastBac1载体,随后插入E2基因,构建重组质粒。随后将重组质粒转化至DH10Bac感受态细胞,经蓝白斑筛选得到重组黏粒,将重组黏粒转染sf21细胞以得到杆状病毒。经扩增后大量感染细胞,检测E2蛋白表达情况,利用镍填料纯化得到E2蛋白,并进行蛋白糖基化水平鉴定及蛋白免疫原性分析。PCR鉴定结果显示成功构建了重组质粒。挑选白斑进行PCR鉴定,证实得到重组黏粒。Western blot检测结果表明,E2蛋白实现了分泌表达,进一步比较细胞培养上清中E2蛋白的表达水平,确定gp67信号肽介导的E2蛋白分泌表达量最高。经镍填料纯化得到E2蛋白,SDS-PAGE结果显示其纯度较高,产率为25 mg·L~(-1)。通过ELISA分析其抗原性,结果表明纯化所得E2蛋白能特异性识别猪瘟阳性血清中的抗体,其抗原性良好。将纯化后的E2蛋白添加ISA201佐剂乳化后免疫BALB/c小鼠,阻断ELISA结果显示,免疫后14 d即产生较高水平的猪瘟特异性抗体,表明E2蛋白免疫原性良好。本研究为E2亚单位疫苗的研制奠定了基础。

  • 相关文献

[1]猪瘟病毒E2蛋白B细胞识别基序的筛选. 王爱萍,马丽平,李姣,邓瑞广,邢广绪,郝慧芳. 2008

[2]抗猪瘟病毒中和性单克隆抗体的制备与鉴定. 刘运超,陈玉梅,冯丽丽,汪磊,王聚财,陆东峰,张改平. 2019

[3]猪瘟病毒E2蛋白酵母表达及其免疫活性研究. 周稳,金前跃,陈晓,丁培阳,李旭峰,王垚,柴永笑,张雨航,周恩民,郭军庆,郅玉宝,张改平. 2020

[4]3种佐剂对猪瘟病毒E2蛋白免疫效果的影响. 陈玉梅,刘运超,祁艳华,梁超,周景明,王爱萍. 2024

[5]猪瘟病毒E2蛋白在大肠杆菌中的表达及免疫原性分析. 王冬雨,魏蔷,刘运超,刘畅,杨棋,崔颖磊,张改平. 2018

[6]鸡免疫球蛋白λ轻链绿色荧光蛋白重组分子在COS7细胞的分泌表达. 张红,刘钧珂,张改平,宋海涛,王青,段艳华,赵光辉. 2007

[7]猪瘟病毒E~(rns)蛋白在杆状病毒表达系统中的分泌表达及活性检测. 魏蔷,白怡霖,柴书军,刘运超,宋亚鹏,张改平. 2020

[8]猪伪狂犬病病毒gE蛋白的真核表达及其活性鉴定. 王清龙,王瑞宁,王勋,李青梅,李鸽,张真真,杨苏珍,郭军庆,张改平. 2023

[9]信号肽对鸡Igλ轻链绿色荧光蛋白重组分子在COS7细胞上分泌表达的影响. 张红,王健,李姣,易明林,韩鸿鹏,张改平. 2008

[10]鸡免疫球蛋白λ轻链绿色荧光蛋白重组分子在COS7细胞的分泌表达. 张红,李姣,王丽,席俊. 2008

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