文献类型： 中文期刊
作者： 王垚 1 ; 金前跃 2 ; 周稳 2 ; 李旭锋 3 ; 柴永笑 3 ; 丁培阳 2 ; 陈晓 2 ; 邢云瑞 4 ; 李艳华 4 ; 郭军庆 4 ; 张改平 3 ;
作者机构： 1.河南农业大学牧医工程学院
2.河南省农业科学院 动物免疫学重点实验室
3.河南农业大学 牧医工程学院
4.河南省农业科学院
关键词： 猪伪狂犬病毒;gE蛋白;毕赤酵母;单克隆抗体
期刊名称： 河南农业科学
ISSN： 1004-3268
年卷期： 2019 年 010 期
页码： 133-139
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 为获得具有生物学活性的猪伪狂犬病毒(PRV)gE蛋白及其特异性单克隆抗体,利用电转技术将pPICZαA-gE重组质粒转入毕赤酵母X-33并筛选出阳性克隆,通过SDS-PAGE、Western blot鉴定筛选出PRV gE蛋白表达菌株.通过诱导表达获得gE分泌蛋白,并利用Ni柱进行纯化,应用Western blot、Dot blot、ELISA方法对纯化蛋白进行活性鉴定.同时将纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,细胞融合后通过免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)筛选单克隆抗体,并对单克隆抗体进行了反应性测定、效价测定及亚型鉴定.结果显示,PRV gE蛋白在毕赤酵母中成功表达,并获得了纯化蛋白,纯度达90%以上,且具有良好的生物学活性,与PRV阳性血清反应性良好;筛选到4株敏感性强、特异性良好的gE单克隆抗体,均可同时特异识别PRV gE蛋白及病毒,分别命名为2F10、4C10、9E1、10C3.综上,用酵母系统成功表达了PRV gE蛋白,并筛选到4株针对PRV gE蛋白的单克隆抗体.
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