文献类型： 中文期刊

作者： 宋诗莹 ¹ ; 郭玮璐 ² ; 夏学峰 ² ; 张雪 ² ; 毕振威 ² ; 张雪寒 ² ; 范宝超 ² ; 董海龙 ³ ; 李彬 ² ;

作者机构： 1.西藏农牧学院动物科学学院

2.江苏省农业科学院兽医研究所

3.西藏大学农牧学院

关键词： 猪干扰素-δ5(pIFN-δ5);表达;纯化;潴流行性腹泻病毒(PEDV);抗病毒活性

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2022 年 49 卷 008 期

页码： 3171-3179

收录情况： 北大核心

摘要： [目的]试验旨在建立大量表达及纯化猪δ5干扰素(pIFN-δ5)的方法,并对其抗猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)感染的作用进行分析.[方法]根据GenBank中pIFN-δ5序列(登录号:NM_001164854.1)设计引物,以猪肝脏组织cDNA为模板进行PCR扩增;将目的基因连接入经EcoR V和Hind Ⅲ双酶切的线性化pET-32a(+)载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,优化诱导表达条件,并进行SDS-PAGE和Western blotting检测;pIFN-δ5蛋白大量表达后使用镍离子亲和层析柱纯化,并测定蛋白纯度;采用细胞病变抑制法检测pIFN-δ5的干扰素效价,采用CCK8方法检测pIFN-δ5的细胞毒性,进一步测定其抗PEDV的感染能力.[结果]试验成功构建了重组表达质粒pET-pIFNδ5,经诱导条件摸索发现,在D600 nm值为0.5~0.6、IPTG浓度为0.8 mmol/L、37℃诱导条件下,目的蛋白pIFN-δ5主要表达于菌体裂解上清中;经大量表达并纯化后可获得纯度>95%的pIFN-δ5蛋白.使用VSV/MDCK细胞滴定系统检测pIFN-δ5的比活性为5×104U/mg;CCK8检测表明pIFN-δ5的细胞毒性较小.实时荧光定量PCR、Western blotting和间接免疫荧光检测结果表明,pIFN-δ5具有显著抗PEDV感染能力.[结论]本试验建立了表达和纯化pIFN-δ5的方法,通过一系列的体外抗病毒试验证实pIFN-δ5具有良好的抗PEDV感染的活性,为将pIFN-δ5作为抗病毒药物及临床应用奠定了基础.