文献类型： 中文期刊
作者： 董嘉文 1 ; 李林林 1 ; 孙敏华 1 ; 张建峰 1 ; 邝瑞欢 1 ; 胡奇林 1 ; 张春红 1 ;
作者机构： 1.广东省农业科学院动物卫生研究所
关键词： 鸭坦布苏病毒;JM株;E蛋白;截断表达;ELISA
期刊名称： 中国动物传染病学报
ISSN： 1674-6422
年卷期： 2017 年 25 卷 01 期
页码： 12-18
收录情况： 北大核心
摘要： 本研究利用RT-PCR扩增鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)JM株E基因截断片段(822 bp),并将其克隆至原核表达载体p ET32a(+),成功构建了重组质粒p ET32a-E。重组质粒转化大肠杆菌Rosseta,经IPTG诱导得到了高效表达。Western blot分析表明,重组蛋白能与DTMUV阳性血清发生特异性反应。将纯化好的DTMUV E蛋白作为包被抗原,建立了检测DTMUV血清抗体的间接ELISA方法。经过条件优化,确定了抗原最适包被浓度为0.093μg/孔,血清的最佳稀释度为1∶100。批内和批间重复试验的最大变异系数分别为3.53%和9.73%。用建立的ELISA方法对免疫鸭坦布苏病毒灭活疫苗的鸭血清和对照鸭血清进行抗体检测,同时与攻毒保护试验进行比较,两者的阳性符合率为86.67%,阴性符合率为100%。
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