文献类型： 中文期刊

作者： 邹娴 ¹ ; 何燕华 ¹ ; 何静怡 ¹ ; 王艳 ¹ ; 舒鼎铭 ¹ ; 罗成龙 ¹ ;

作者机构： 1.广东省农业科学院动物科学研究所畜禽育种国家重点实验室广东省畜禽育种与营养研究重点实验室

关键词： 鸡;原始生殖细胞;稳定转染;脂质体

期刊名称： 遗传

ISSN： 0253-9772

年卷期： 2021 年 003 期

页码： 280-288

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为获得鸡原始生殖细胞（primordial germ cells,PGCs）的最佳转染效率,本研究比较不同质粒用量和不同细胞数在3种转染试剂（Lipofectamine 2000、3000和LTX&Plus Reagent）中PGCs的转染效率,利用荧光激活细胞分选技术（fluorescence activated cell sorting technology,FACS）辅助优化Lipofectamine 3000转染试剂,经FACS进一步分选获得带绿色荧光蛋白（GFP）的PGCs,继续培养3周后,移植回注到受体鸡胚中,移植3.5 d后分离性腺拍照观察。结果显示,转染试剂Lipofectamine 3000的转染效率最高,质粒、Lipofectamine 3000转染试剂和PGCs细胞数的配比为3μg:4μL:0.5×10⁴个,转染5h转染效率最高,达到23.4%,与现有的研究结果相比提高了2倍以上。移植回注PGCs到受体鸡胚中,荧光显微镜观察到鸡胚性腺中有GFP阳性细胞。本研究综合考虑转染试剂、质粒用量和细胞数量的影响因素以优化PGCs的转染条件,为高效制备转基因鸡及基因编辑鸡的研究奠定基础。