文献类型： 中文期刊

作者： 孙冰 ¹ ; 李彬 ² ; 何孔旺 ² ; 郭容利 ² ; 倪艳秀 ² ; 俞正玉 ² ; 姜平 ¹ ;

作者机构： 1.南京农业大学动物医学院

2.江苏省农业科学院兽医研究所

关键词： 猪流行性腹泻病病毒;N基因;序列分析;蛋白表达

期刊名称： 畜牧与兽医

ISSN： 0529-5130

年卷期： 2014 年 46 卷 05 期

页码： 72-76

收录情况： 北大核心

摘要： 猪流行性腹泻病(Porcine epidemic diarrhea,PED)是我国猪群近两年的多发疾病。本试验于2012年在安徽分离到一株猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)AH2012。为研究该变异株N基因的特性,采用RT-PCR方法获得了其N基因片段,经测序后与其他代表性的PEDV基因序列进行同源性比较和遗传进化分析,发现该毒株与近年来在我国流行的几株PEDV变异株同源性在99.3~99.5%之间,进化分析显示该毒株属于目前流行的PEDV变异株。将其克隆到表达载体pET28a(+)中,构建了重组质粒pET28a-N,经测序鉴定正确后,转化至感受态细胞BL21(DE3)中,并进行IPTG诱导表达。结果表明,重组菌可表达分子量为65 ku的融合蛋白,蛋白表达量较高,蛋白免疫印迹结果显示,表达的N蛋白能与PEDV阳性血清发生特异性的免疫反应,表明原核表达的N蛋白具有良好的反应原性。该研究可为猪流行性腹泻病的流行病学调查、诊断与防控方法的建立奠定基础。