文献类型： 中文期刊

作者： 王清龙 ¹ ; 王瑞宁 ¹ ; 王勋 ² ; 李青梅 ³ ; 李鸽 ⁴ ; 张真真 ⁵ ; 杨苏珍 ³ ; 郭军庆 ³ ; 张改平 ² ;

作者机构： 1.河南牧业经济学院

2.河南省农业科学院动物免疫学重点实验室

3.河南省农业科学院

4.西北农林科技大学动物医学院

5.河南农业大学动物医学院

关键词： 猪伪狂犬病病毒;gE蛋白;分泌表达;糖基化修饰;抗原活性

期刊名称： 河南农业科学

ISSN： 1004-3268

年卷期： 2023 年 003 期

页码： 127-134

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为制备猪伪狂犬病病毒（PRV）gE重组蛋白并评估其抗原活性，将优化的PRV gE基因胞外区插入真核表达载体pCMV并在其C端加入Hexa-His标签，构建真核表达质粒pCMV-gE；将重组质粒转染HEK293F细胞，Dot blot鉴定转染细胞中gE重组蛋白的分泌表达；利用镍亲和层析和凝胶过滤层析从转染细胞培养上清中纯化gE表达蛋白；以SDS-PAGE和Western blot鉴定gE重组蛋白，利用PRV阳性血清以ELISA分析gE重组蛋白的抗原活性，通过去糖基化酶PNGase F鉴定其糖基化修饰及其对抗原活性的影响。Dot blot结果显示，gE重组蛋白通过自身信号肽实现在细胞培养上清的分泌表达，其表达量在转染96 h达到峰值。SDS-PAGE和Western blot结果显示，从细胞培养上清中纯化获得gE重组蛋白纯度约为90%，经去糖基化酶PNGase F处理的gE重组蛋白分子质量显著降低。间接ELISA结果显示，gE重组蛋白检测PRV阳性血清的抗体效价为1∶12 800;PRV阳性血清对gE蛋白的检出限为31.25 ng/mL，其抗原活性是原核表达的4倍。对临床血清的检测结果显示，基于gE重组蛋白的ELISA与IDEXX抗体检测试剂盒的符合率为96.5%。综上，在真核细胞中分泌表达了具有高表达量、高纯度、高活性和糖基化修饰的gE重组蛋白，在PRV感染鉴别检测中具有良好的应用潜力。