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棕榈科植物基因克隆方法的优化

文献类型： 中文期刊

作者： 李静 1 ; 王永 1 ; 杨耀东 1 ; 雷新涛 1 ; 夏薇 1 ;

作者机构： 1.中国热带农业科学院椰子研究所/海南省热带油料作物生物学重点实验室

关键词： 棕榈科植物;基因克隆;优化;胶回收率

期刊名称： 南方农业学报

ISSN： 2095-1191

年卷期： 2014 年 45 卷 12 期

页码： 2123-2128

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】优化棕榈科植物基因克隆方法,为其基因组学研究和分子育种奠定基础。【方法】通过优化DNA提取和目的片段回收步骤,检测其对提取DNA质量和纯度、目的片段回收率与阳性克隆等的影响。【结果】DNA提取方法优化后,提取获得的DNA完整性好,无杂质、无弥散现象,质量较好,其OD260/OD280在1.88~1.93;优化前不同样品提取的DNA仅为40.0~60.0 ng/μL,优化后样品DNA在104.5~214.8 ng/μL,为优化前的2~3倍;目的片段回收方法经优化后,可以从扩增的PCR产物中回收获得条带较清晰的目的片段,其胶回收率较高;对回收的目的片段进行亚克隆,以gyspy74引物鉴定阳性克隆,每个样品的菌落均在700 bp左右扩增获得清晰的目的条带,且其中3个菌落的目的条带测序结果与预期核酸序列一致。【结论】优化后的方法适用于棕榈科植物基因克隆。

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