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AcNPV polyhedrin与cry3Aa基因的重组与重组融合蛋白在大肠菌中的表达

文献类型: 中文期刊

作者: 高博 1 ; 邓柳红 2 ; 易小平 2 ; 张春发 3 ;

作者机构: 1.海南大学生命科学与农学院中国热带农业科学院热带生物技术研究所

2.中国热带农业科学院热带生物技术研究所

3.辽宁省蚕业科学研究所

关键词: BT cry3Aa;AcNPV polyhedrin;重组;表达

期刊名称: 中国生物工程杂志

ISSN: 1671-8135

年卷期: 2008 年 S1 期

页码: 65-69

收录情况: 北大核心 ; CSCD

摘要: 目的:将cry3Aa基因与斜纹夜蛾多角体蛋白(AcNPV Polyhedrin)基因重组,构建重组蛋白原核表达载体并在大肠杆菌中表达。方法:首先以PHT305a载体质粒DNA为模板,PCR扩增cry3Aa基因。再以PET30a-ph-1a载体质粒DNA为模板,PCR扩增多角体蛋白基因。将两基因片段分别连入PMD18-T克隆载体,测序鉴定。表达载体的构建分为两步,先将SacI和XhoI双酶切下来的cry3Aa基因连入表达载体pET30a,再将PMD18T-Ph经BglⅡ和SacI双酶切,所获得的ph基因片段与具有BglⅡ/SacI末端的pET30a-cry3Aa相连接,构建表达载体pET30a-cry3Aa-ph,表达载体转化进入大肠杆菌BL21(DE3)。IPTG诱导蛋白表达并纯化,SDS-PAGE分析结果。结果:cry3Aa和AcNPV Polyhedrin基因序列与报道完全一致。1mmol/LIPTG诱导4h表达的外源蛋白,经SDS-PAGE分析显示在大约103kDa处有表达产物特异条带。结论:获得cry3Aa与polyhedrine基因的重组蛋白工程菌株,为此基因应用于杀虫剂奠定了基础。

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