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玉米大斑病菌STK2的基因组定位、蛋白质结构预测及其表达

文献类型： 中文期刊

作者： 巩校东 1 ; 范钰 1 ; 李坡 2 ; 杨阳 1 ; 张长志 1 ; 田兰 1 ; 张晓玉 1 ; 范永山 3 ; 韩建民 1 ; 谷守芹; 董金皋;

作者机构： 1.河北农业大学生命科学学院

2.河北省农林科学院植物保护研究所

3.唐山师范学院生命科学系

关键词： 玉米大斑病菌;生物信息学分析;真核表达;MAPK

期刊名称： 中国农业科学

ISSN： 0578-1752

年卷期： 2013 年 46 卷 012 期

页码： 2599-2606

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： [目的]确定玉米大斑病菌STK2在基因组中的位置;解析目的蛋白质Stk2的结构特征;构建STK2真核表达载体,获得真核表达体系中的胞外分泌蛋白.[方法]利用生物信息学方法,确定STK2在玉米大斑病菌基因组中的确切位置,解析Stk2蛋白质的结构特征;根据STK2的ORF序列及真核表达载体pPIC9K的多克隆位点设计引物,构建真核表达载体,采用电击转化法将重组质粒转入宿主菌GS115中进行诱导表达,利用SDS-PAGE检测并鉴定目的蛋白质.[结果]玉米大斑病菌STK2的ID为91433,该基因位于scaffold3正链的1561986-1563262位置;Stk2蛋白具有MAPK类蛋白激酶的特征性保守结构域,其二级结构主要以α螺旋和无规则卷曲为主,β折叠较少且主要存在于N端,其三级结构具有1个较小的N端域和1个较大的C端域;成功构建了STK2的真核表达载体pPIC9K-STK2,筛选获得了抗性转化子;在毕赤酵母菌中,经甲醇诱导得到了1个分子量约为41 kD的蛋白质组分且被分泌至胞外,该蛋白质的大小与理论分子量相符,推测Stk2蛋白已在宿主菌中表达并被分泌至胞外.[结论]玉米大斑病菌STK2位于scaffold3正链的1561986-1563262位置;Stk2具有MAPK激酶的所有特征性保守结构域,属于典型的MAPK蛋白激酶;该基因能在真核细胞中表达,获得了可溶性分泌蛋白质,为Stk2蛋白的多克隆抗体制备及基因的功能研究奠定基础.

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