文献类型： 中文期刊

作者： 孙雪珂 ¹ ; 丁培阳 ² ; 王思桥 ¹ ; 刘思源 ³ ; 李明慧 ³ ; 常泽杰 ³ ; 陈艺兰 ³ ; 李瑞琪 ³ ; 张改平 ¹ ;

作者机构： 1.河南农业大学生命科学学院

2.郑州大学生命科学学院

3.河南省农业科学院

关键词： 猪δ冠状病毒;S1蛋白;CHO细胞;稳定表达;蛋白质纯化

期刊名称： 河南农业科学

ISSN：

年卷期： 2023 年 006 期

页码： 131-138

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为构建稳定表达猪δ冠状病毒（PDCoV）S1蛋白的CHO细胞系，利用电转染技术将重组质粒pCGS3-S1转染至CHO细胞，通过有限稀释法筛选稳定表达重组S1蛋白的单克隆细胞系。利用阴离子交换层析和凝胶过滤层析方法对重组S1蛋白进行纯化，采用间接ELISA方法检测重组S1蛋白活性。将纯化的重组S1蛋白免疫BALB/c小鼠，通过间接ELISA、间接免疫荧光试验（IFA）及病毒中和试验对重组S1蛋白免疫原性进行检测。结果显示，稳定表达PDCoV S1蛋白的CHO细胞系成功建立，并获得了纯度高于90%、产量为28.5 mg/L的重组S1蛋白；且重组S1蛋白与PDCoV阳性血清反应性良好，具有良好的免疫原性，中和效价为1∶128。综上，成功建立了稳定表达PDCoV S1蛋白的CHO细胞系，且纯化获得的重组S1蛋白具有良好的生物学活性。