文献类型： 中文期刊

作者： 梁雨欣 ¹ ; 李忠鹏 ¹ ; 张春雨 ¹ ; 侯吉超 ¹ ; 李小宇 ¹ ; 王永志 ¹ ;

作者机构： 1.吉林省农业科学院植物保护研究所

关键词： Bar基因;单克隆抗体;抗原表位;双抗夹心ELISA （DAS-ELISA）

期刊名称： 农业生物技术学报

ISSN：

年卷期： 2021 年 003 期

页码： 591-598

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 随着转基因大豆（Glycine max）市场的扩大,我国对转基因大豆的食品安全、环境风险等问题争议日渐加剧。越来越多的国家要求对转基因食品进行标识,部分国家对转基因成分含量亦有要求。为了建立转Bar基因大豆的快速、有效检测方法,对转Bar基因大豆进行定量检测,本研究以纯化的膦丝菌素乙酰转移酶（phosphinothricin acetyltransferase, PAT）蛋白为抗原免疫小鼠（Mus musculus）,成功制备了18株特异性良好的PAT单克隆抗体（monoclonal antibody, MAb）,利用在大肠杆菌（Escherichia coli）中表达的PAT分段蛋白筛选到一组能进行夹心ELISA的配对单克隆抗体9F5和3G12,并以这对单抗为基础建立了PAT快速定量双抗夹心ELISA （double antibody sandwich ELISA, DAS-ELISA）检测方法。该方法以9F5为捕获抗体包被酶标板,检测抗体3G12经辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase, HRP）标记后以2μg/mL的工作浓度与抗原在37℃共同孵育30 min,室温避光显色15～20 min。该检测方法检测限为1.69 ng/mL,对PAT蛋白的检测范围为0.5～8.0μg/mL,板内板间变异系数均小于10%。该法灵敏度高、稳定性好,1 h即可完成检测,为转Bar基因大豆的快速定量检测提供了技术支撑。