文献类型： 中文期刊

作者： 姚静静 ¹ ; 胡骁飞 ¹ ; 韩俊岭 ¹ ; 徐帆 ¹ ; 滕蔓 ¹ ; 邢云瑞 ¹ ; 孙亚宁 ¹ ; 邓瑞广 ¹ ; 张改平 ¹ ;

作者机构： 1.河南省农业科学院动物免疫学重点实验室农业部动物免疫学重点实验室;郑州人民医院泌尿外科;河南农业大学生命科学学院;河南农业大学牧医工程学院

关键词： 黄曲霉毒素B_1;细胞融合;单克隆抗体;ELISA

期刊名称： 动物营养学报

ISSN： 1006-267X

年卷期： 2019 年 03 期

页码： 1405-1414

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了快速准确检测粮食与饲料中黄曲霉毒素B_1(AFB_1)含量,本试验制备了具有高灵敏度的AFB_1单克隆抗体,并将其应用于AFB_1间接竞争酶联免疫吸附测定(ELISA)方法的建立。采用碳二亚胺(EDC)法制备AFB_1完全抗原[AFB_1-牛血清白蛋白(BSA)和AFB_1-鸡卵白蛋白(OVA)],并免疫B_ALB/c小鼠。经细胞融合,筛选出能够分泌高灵敏度AFB_1单克隆抗体的杂交瘤细胞株。采用体内诱生腹水法,大量制备AFB_1单克隆抗体,并对其免疫学特性进行鉴定。基于制备的AFB_1单克隆抗体,建立AFB_1间接竞争ELISA检测方法。结果显示:通过筛选,获得稳定产生抗体的杂交瘤细胞株9H1F5,经间接ELISA方法测定,获得的AFB_1单克隆抗体的效价高达5.12×105,亲和力常数(Ka)=6.72×107L/mol,抗体亚型为免疫球蛋白G_2(IgG_2)。采用间接竞争ELISA方法测得AFB_1的半数抑制浓度(IC_(50))为0. 232 ng/mL,检测范围为0.014～1.920 ng/mL,最低检测限为0.014 ng/mL。同时,该AFB_1单克隆抗体与黄曲霉毒素B_2(AFB_2)、黄曲霉毒素G_1(AFG_1)、黄曲霉毒素G_2(AFG_2)、黄曲霉毒素M1(AFM1)的交叉反应率分别为40.21%、33.19%、31.96%、4.40%,与其他霉菌毒素无交叉反应。由上述结果可知,本试验成功制备了灵敏度高、特异性强的AFB_1单克隆抗体,并基于该抗体建立了检测AFB_1的间接竞争ELISA方法,为粮食与饲料中AFB_1快速免疫学检测奠定了基础。