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H5亚型禽流感病毒HA基因昆虫／杆状病毒系统的表达及对BALB/c小鼠的免疫保护

文献类型： 中文期刊

作者： 孟庆文 1 ; 刘光亮 1 ; 于康震 2 ; 童光志 1 ; 刘娣 3 ; 施建忠 1 ; 陈化兰 1 ;

作者机构： 1.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、农业部动物流感重点开放实验室、兽医生物技术国家重点实验室

2.农业部畜牧兽医总站

3.东北林业大学博士后流动站、黑龙江省农业科学院博士后工作站

关键词： 禽流感病毒血凝素;重组杆状病毒;亚单位疫苗;免疫保护

期刊名称： 科技导报

ISSN： 1000-7857

年卷期： 2006 年 24 卷 03 期

页码： 7-10

摘要： 经RT-PCR扩增了禽流感病毒A/Goose/Guangdong/1／96 H5N1亚型1．7kb HA基因的cDNA,将其克隆到pMD18-T中并测序。亚克隆到杆状病毒转移载体pMelBacA的蜜蜂蜂毒素分泌信号下游中,测序正确后与线性化的杆状病毒DNA(Bac-N-BlueTM DNA)共转染Sf9昆虫细胞。将重组杆状病毒感染HFive细胞,72h左右收获细胞,超声波裂解,SDS—PAGE结果表明HA基因在重组杆状病毒感染的HFive细胞中获得表达。蛋白胶薄层扫描分析显示:表达的HA蛋白占重组杆状病毒感染细胞总蛋白含量的17．1％。Western-blot 及血凝实验结果显示,表达的禽流感H5N1亚型病毒HA蛋白具有生物学活性。表达的H5 HA蛋白定量乳化后,皮下多点注射免疫SPF 级BALB/c雌性小鼠,免疫后产生了H5 HA特异抗体,并在三免前后达到并保持较高水平。用致死剂量的HPAIV H5N1攻击小鼠,免疫组小鼠提供了100％的保护力,而对照组小鼠先后发病且死亡:为研制禽流感H5N1亚型病毒亚单位疫苗,防制禽流感奠定了基础。

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