文献类型： 中文期刊

作者： 张红心 ¹ ; 陈超 ¹ ; 王桂兰 ¹ ; 乔永旭 ¹ ; 赵璞 ² ; 马春红 ² ;

作者机构： 1.唐山师范学院

2.河北省农林科学院

关键词： CHX;GFP;融合基因

期刊名称： 华北农学报

ISSN： 1000-7091

年卷期： 2014 年 29 卷 06 期

页码： 36-39

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为构建CHX-GFP融合基因并将其在胡萝卜愈伤组织中瞬时表达。采用融合PCR方法,将属于CAP2家族的Na+/H+反向转运蛋白基因CHX和GFP基因相融合,利用中间载体,采用DNA重组技术将CHX-GFP融合基因插入到p1301植物表达载体中,采用冻融法将重组质粒导入到农杆菌中,遗传转化时所用侵染液为1/2MS+AS 100μmol/L,共培养基为MS+6-BA 0.5 mg/L+2,4-D 0.5 mg/L+琼脂6 g/L+蔗糖30 g/L+葡萄糖10 g/L+AS 50μmol/L,共培养时间为4 d。成功构建了p1301-35S-CHX-GFP-Nos植物表达载体,CHX-GFP融合基因在胡萝卜愈伤组织中得到瞬时表达,表达效率为75%。采用融合PCR获得CHX-GFP融合基因的方法比较简单,无须知道DNA序列的酶切位点,省时省力,CHX-GFP融合基因及其表达载体的成功构建将为进一步探查CHX亚细胞定位及CHX基因的功能奠定了基础。