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鸡胚成纤维细胞cDNA T7噬菌体表达文库的构建和鉴定

文献类型： 中文期刊

作者： 赵绪永 1 ; 张改平 2 ; 朱礼倩 1 ; 李清州 1 ;

作者机构： 1.河南农业大学

2.河南省农业科学院

关键词： 鸡胚成纤维细胞(CEF);T7噬菌体;cDNA表达文库

期刊名称： 河南农业科学

ISSN： 1004-3268

年卷期： 2008 年 37 卷 07 期

页码： 100-103

收录情况： 北大核心

摘要： 构建鸡胚成纤维细胞(CEF)T7噬菌体表达型cDNA文库,为筛选和研究CEF上病毒受体分子奠定基础。提取纯化CEF的mRNA,反转录合成双链cDNA,补平末端,连接EcoRⅠ/HindⅢ接头,双酶切,凝胶过滤层析除去小于400bp的cDNA片段,合成双链cDNA定向与T7噬菌体左右臂连接,体外包装后建成cDNA表达文库。测定文库大小、重组率,并以PCR鉴定cDNA插入片段的大小。结果表明,构建的cDNA文库滴度为2.2×107pfu/mL、扩增后滴度为3.5×1010pfu/mL,重组效率达98%、插入片段多在0.4～3kb之间,平均插入片段长约1.3kb。表明所建文库具有很高的质量,从而为筛选目的cDNA克隆奠定了基础。

  • 相关文献

[1]鸡B淋巴细胞cDNA T7噬菌体表达文库的构建与鉴定. 张改平,张红,郭军庆,王选年,乔松林,郝慧芳,王丽. 2007

[2]鸡胚成纤维细胞cDNA真核表达文库的构建及鉴定. 张改平,朱礼倩,杨艳艳,赵绪永,乔松林,张红,王丽,李清州,王选年. 2008

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