文献类型： 中文期刊
作者： 许夏冰 1 ; 谭德冠 1 ; 孙雪飘 1 ; 弓淑芬 1 ; 张家明 1 ;
作者机构： 1.海南大学农学院;中国热带农业科学院热带生物技术研究所, 农业部热带作物生物学与遗传资源利用重点实验室, 海南省热带生物质能源工程技术研究中心
关键词： 普通小球藻;叶绿体DNA;尿素;月桂酰肌氨酸钠;percoll分离液
期刊名称： 植物生理学报
ISSN： 2095-1108
年卷期： 2014 年 06 期
页码： 880-884
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 本文采用尿素-月桂酰肌氨酸钠(urea-sarkosyl)法,用于分离带有坚硬细胞壁小球藻的高纯度叶绿体DNA(cpDNA)。将对数生长期的小球藻收集后置于冰上研磨,percoll密度梯度离心收集叶绿体层,显微观察表明叶绿体经梯度离心后形态完整。采用尿素-月桂酰肌氨酸钠法、蛋白酶K消化及酚/氯仿/异戊醇抽提,获得了高纯度的cpDNA。检测结果显示,cpDNA分子长度为22 kb,A260:A280值为1.87±0.01,产率达(2.52±0.01)μg·g-1(DW);cpDNA编码的16S rDNA扩增呈阳性,而由细胞核编码的18S rDNA扩增呈阴性。表明cpDNA纯度高,没有受到核基因组DNA的污染,符合小球藻cpDNA高通量测序的要求。同时,该方法也适合提取具有相似细胞壁成分的其他微藻的基因组DNA和cpDNA。
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