文献类型： 中文期刊

作者： 汪浩 ¹ ; 乔绪稳 ² ; 陈瑾 ² ; 李图帅 ² ; 张元鹏 ² ; 侯继波 ² ; 郑其升 ² ; 孙卫东 ¹ ;

作者机构： 1.南京农业大学动物医学院

2.国家兽用生物制品工程技术研究中心

关键词： 乳酸乳球菌;锚钩蛋白;原核表达;GEM颗粒;结合活性

期刊名称： 畜牧与兽医

ISSN： 0529-5130

年卷期： 2016 年 48 卷 09 期

页码： 1-6

收录情况： 北大核心

摘要： 比较3种含不同个数基序肽聚糖锚钩蛋白(protein anchor,PA)的结合活性。首先应用PCR技术分别扩增得到含有1个、2个和3个自溶素基序(Lysin Motif,Lys M)基因片段的PA、PA2与PA3;然后应用含纳米抗体(nanobody,Nb)基因的重组质粒p ET-28a(+)-Nb构建原核表达载体,将其转化大肠杆菌BL-21(DE3),进行诱导表达,获得目的蛋白;最后将可溶性的PA-Nb、PA2-Nb、PA3-Nb融合蛋白与GEM(Gram-positive enhancer matrix)颗粒结合,经Western blot与SDS-PAGE进行结合鉴定与结合活性比较分析。试验结果显示裂解后可溶性的融合蛋白PA-Nb、PA2-Nb、PA3-Nb都能与GEM颗粒结合,PA2-Nb与GEM颗粒的结合活性明显好于PA-Nb,PA2-Nb的表达量和可溶性明显优于PA3-Nb,PA2-Nb与GEM颗粒的结合活性与PA3-Nb相当。本研究可为进一步完善乳球菌外壳-蛋白锚钩展示系统提供理论依据。