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转Cp4 epsps基因大豆快速DAS-ELISA检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

作者： 候吉超 1 ; 李忠鹏 1 ; 梁雨欣 1 ; 张春雨 1 ; 李小宇 1 ; 王永志 1 ;

作者机构： 1.吉林省农业科学院

关键词： CP4-EPSPS;双抗夹心ELISA;大豆;检测

期刊名称： 植物保护

ISSN： 0529-1542

年卷期： 2021 年 004 期

页码： 128-133,173

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了快速检测转Cp4 epsps基因大豆,本研究以纯化后的CP4-EPSPS单克隆抗体1D12为捕获抗体,辣根过氧化物酶标记的羊抗CP4-EPSPS多克隆抗体8092为检测抗体,通过优化抗体工作浓度和抗原抗体反应时间,成功建立转Cp4 epsps基因大豆快速双抗夹心ELISA检测方法。结果显示:最佳检测条件为捕获抗体浓度10μg/mL,检测抗体浓度1.25μg/mL,样品与检测抗体先后加入酶标板37℃共同孵育60 min。该方法的检测范围为0.312 5～80μg/mL,待检叶片、籽粒最佳检测范围为10～80倍稀释;板内变异系数为1.64%～5.42%,板间变异系数为3.05%～9.13%,符合ELISA定性试剂盒参考标准;对100份大豆叶片、20份大豆籽粒进行检测,与Western blot结果和标准结果进行比较,符合率为100%,表明该检测方法具有良好的准确性和重复性。该检测方法75 min内即可完成检测,适用于快速检测转Cp4 epsps基因大豆,为转Cp4 epsps基因快速检测试剂盒的开发奠定了基础。

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