文献类型： 中文期刊

作者： 王选年 ¹ ; 周继勇 ² ; 杨艳艳 ³ ; 邢广旭 ³ ; 李青梅 ² ; 杨继飞 ³ ; 柴书军 ³ ; 赵东 ³ ; 康晓笛 ⁴ ; 张改平 ⁵ ;

作者机构： 1.河南职业技术师范学院动物科学系

2.浙江大学动物科学学院

3.河南省农业科学院生物技术研究所

4.河南百奥生物工程有限公司

5.郑州450002

关键词： β-肾上腺素激动剂;克伦特罗;单克隆抗体;免疫学特性

期刊名称： 中国免疫学杂志

ISSN： 1000-484X

年卷期： 2004 年 20 卷 03 期

页码： 194-198

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的 :建立抗克伦特罗 (CL)单克隆抗体杂交瘤细胞系 ,制备CL单克隆抗体 ,并鉴定其免疫学特性。方法 :用重氮化法将半抗原CL偶联于载体蛋白BSA ,形成结合抗原BSA CL ;以BSA CL免疫BALB/C小鼠 ,应用杂交瘤技术建立分泌CL单克隆抗体细胞株 ;用体内诱生腹水法生产CL单抗 ,硫酸钠盐析法提纯。应用抗小鼠同种型抗体测定单抗的同种型 ,用竞争性ELISA和胶体金膜层析试验测定CL单抗的反应特异性和反应动力学。结果 :筛选出C 4G1、C 2H6、C 2D6和C 4C94株高敏感性和高特异性杂交瘤生产单抗 ,其单抗的间接ELISA效价分别为 5× 10 -5、3× 10 -4、6× 10 -4、2× 10 -5;同种型分别为IgG1/κ、IgG1/κ、IgG2a/κ、IgG2a/λ。C 4G1的亲和力常数K =1 6 8× 10 8L/mol,C 2H6的亲和力常数K =1 3× 10 8L/mol。经WestGold蛋白质印迹鉴定单抗与CL特异性结合。C 4G1单抗对CL的半数抑制浓度 (IC50 )为 7 94ng/ml,对沙丁胺醇 (Sb)的IC50 为 10 0 0ng/ml,对肾上腺素、去甲肾上腺素、异丙肾上腺素和来克多巴胺的IC50 均≥ 6 4 0 0ng/ml;C 4G1单抗与Sb的交叉反应性为0 79% ,与异丙肾上腺素的交叉反应性为 0 12 % ,而与肾上腺素、去甲肾上腺素、来克多巴胺、各类抗生素及多种维生素均无交叉反应性。结论 :用单克隆抗体杂交瘤技术