文献类型： 中文期刊
作者： 张莉 1 ; 康雪燕 1 ; 章振华 1 ; 李永清 1 ; 盖丽丽 1 ; 姜世金 2 ; 张培君 1 ;
作者机构： 1.北京市农林科学院畜牧兽医研究所
2.山东农业大学动物医学院
关键词： 毕赤酵母;猪传染性胃肠炎病毒;纤突糖蛋白S基因;免疫原性
期刊名称： 华北农学报
ISSN： 1000-7091
年卷期： 2015 年 30 卷 06 期
页码： 84-90
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 为了获得具有良好免疫活性的基因工程抗原蛋白,利用毕赤酵母真核表达系统,表达猪传染性胃肠炎(河北分离株)的纤突糖蛋白。根据Gen Bank TGEV S基因设计一对引物,经PCR扩增出长2.2 kb的目的基因S,将S基因亚克隆于p PIC9k载体,转化TOP10感受态,PCR、酶切鉴定阳性克隆,SalⅠ线性化重组穿梭质粒pPIC9k-S,然后电转GS115感受态,利用G418抗性进行多拷贝整合子初步筛选,提取基因组并做PCR鉴定,得到阳性菌株,经诱导发酵后,上清发酵液经SDS-PAGE电泳检测,显示获得分子量为82 kDa左右的目的蛋白,同时用Western-Blotting检测到一条特异的目的条带;用目的蛋白免疫小鼠,ELISA检测免疫S蛋白小鼠血清抗体效价为1∶100,表达蛋白具有免疫活性。
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