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山羊SKIP基因重组腺病毒载体的构建

文献类型： 中文期刊

作者： 熊琪 1 ; 张年 1 ; 索效军 1 ; 李晓锋 1 ; 刘洋 1 ; 陈明新 1 ;

作者机构： 1.湖北省农业科学院畜牧兽医研究所/动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室

关键词： 重组腺病毒;山羊SKIP基因;基因过表达;感染细胞

期刊名称： 湖北农业科学

ISSN： 0439-8114

年卷期： 2013 年 52 卷 21 期

页码： 148-151

收录情况： 北大核心

摘要： 试验利用Gateway技术构建含山羊SKIP基因的重组腺病毒载体。首先采用PCR扩增山羊SKIP基因连接入pcDNA3.1(+),将酶切回收的SKIP产物片段克隆至腺病毒穿梭载体pYr-adshuttle-2获得重组质粒pYr-adshuttle-2-SKIP。从该重组质粒上,利用LR同源重组将SKIP-EGPF表达框转移至腺病毒骨架质粒pAd/PL-DEST,获得重组腺病毒质粒pAd-SKIP。该质粒经pacI线性化后转染HEK293A细胞包装病毒,获得重组腺病毒rAd-SKIP。重组腺病毒分别经酶切和PCR等方法进行鉴定。荧光显微镜观察转染效果。结果证实腺病毒载体中含有SKIP基因的目的片段,荧光显微镜发现该重组腺病毒能在C2C12细胞中高效表达。表明成功构建了同时表达SKIP蛋白和绿色荧光蛋白的重组腺病毒,为下一步开展关于SKIP基因的功能研究奠定了基础。

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