文献类型： 中文期刊
作者： 李明 1 ; 何孔旺 2 ; 陆承平 1 ;
作者机构： 1.南京农业大学/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室
2.江苏省农业科学院兽医研究所/农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室
关键词： 猪链球菌2型;溶菌酶释放蛋白;胞外蛋白因子;融合表达;中和表位
期刊名称： 中国农业科学
ISSN： 0578-1752
年卷期： 2005 年 38 卷 06 期
页码： 1264-1269
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 根据猪链球菌2型(Streptococcussuistype2,SS2)溶菌酶释放蛋白(muramidase-releasedprotein,MRP)和胞外蛋白因子(extracellularproteinfactor,EPF)的基因序列,各设计合成一对引物,以猪链球菌2型江苏分离株SS2-1的基因组为模板,扩增mrp基因1801~2513位序列和epf基因1783~2563位序列,分别构建原核表达载体pET32a-mrp、pET32a-epf,确定诱导表达的两种蛋白都具有免疫原性后,提取阳性克隆质粒各自进行双酶切并纯化,通过PCR串联两片段,将目的片段定向克隆到表达载体pET-32a中,重组质粒转化入大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达分子量约为74kD的融合蛋白。用制备的两种抗血清与纯化融合蛋白进行免疫转印,结果显示融合蛋白分别具有MRP与EPF的中和表位。用融合蛋白MRP-EPF免疫新西兰兔,以最小致死量猪链球菌强毒株SS2-1攻击,兔的存活率达50%(2/4),存活率明显高于单个表达产物。证实串联表达的融合蛋白为重要的保护性抗原。
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