文献类型： 中文期刊

作者： 张雪 ¹ ; 范宝超 ² ; 赵永祥 ² ; 钱嘉莉 ² ; 王传红 ² ; 徐红 ² ; 郭容利 ² ; 李彬 ² ; 贾斌 ¹ ;

作者机构： 1.石河子大学动物科技学院

2.江苏省农业科学院兽医研究所

关键词： 成簇规律间隔的短回文重复序列相关蛋白（CRISPR/Cas9）;猪流行性腹泻病毒;遗传筛选;整合素α11

期刊名称： 微生物学通报

ISSN： 0253-2654

年卷期： 2022 年 012 期

页码： 5138-5149

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【背景】成簇规律间隔的短回文重复序列相关蛋白（clusteredregularlyinterspacedshort palindromic repeats/CRISPR-associated protein,CRISPR/Cas9）已被广泛证实是高效、强大的第三代基因编辑工具，在发现功能基因等领域取得了重要进展，但至今尚无利用该方法挖掘猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）宿主基因的报道。【目的】利用CRISPR/Cas9系统在全基因组范围内筛选PEDV复制相关基因，并进行候选基因的初步验证，为培育抗PEDV种猪提供科学参考。【方法】通过CRISPR/Cas9技术构建人肝癌细胞系（Huh-7）全基因组敲除文库，利用PEDV感染Huh-7文库细胞，随后经过高通量测序筛选影响PEDV复制的关键宿主因子，结合基因干扰和检测病毒效价等相关试验对影响PEDV复制的候选基因进行初步验证。【结果】构建了CRISPR/Cas9系统在全基因组范围内筛选PEDV复制相关基因的方法，将富集程度排名靠前的整合素α11 （integrin α11,ITGA11）、哺乳动物复制蛋白A2 （replication protein A2,RPA2）、驱动蛋白家族成员2A （kinesin family member 2A,KIF2A）、诱导髓系白血病细胞分化蛋白1 （induced myeloid leukemia cell differentiation protein 1,MCL1）、多聚ADP核糖化酶1 [poly （ADP-ribose） polymerase1,PARP1]和囊泡单胺转运蛋白（vesicular monoamine transporter,SLC18A1）基因进行了验证；采用siRNA对上述基因分别进行干扰后，结果与对照组相比，干扰ITGA11可显著降低PEDV猪源靶向细胞IPEC-J2中PEDV-N mRNA、蛋白表达水平及子代病毒滴度。【结论】基于CRISPR/Cas9系统的全基因组敲除文库可作为挖掘PEDV复制相关功能基因的有效工具，ITGA11基因可作为一种制备抗PEDV猪种潜在的靶基因。