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猪细胞因子信号传导抑制因子1蛋白的表达纯化与多克隆抗体制备

文献类型： 中文期刊

作者： 夏爽飞 1 ; 陈鑫鑫 1 ; 乔松林 1 ; 柴书军 1 ; 罗雪刚 1 ; 谢莎 1 ; 张改平 1 ;

作者机构： 1.河南农业大学牧医工程学院;河南省农业科学院河南省动物免疫学重点实验室农业部动物免疫学重点开放实验室

关键词： 猪SOCS1;生物信息学分析;原核表达;多克隆抗体

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2019 年 06 期

页码： 707-714

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为制备猪细胞因子信号传导抑制因子1(SOCS1)的多克隆抗体,采用RT-PCR扩增猪SOCS1基因序列,将其克隆至原核表达载体pET-28a(+),构建重组表达载体pET28a-pSOCS1,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,在不同温度、IPTG浓度、诱导时间等条件下进行表达,确定最佳表达条件,并对重组蛋白pSOCS1进行纯化。以表达的重组蛋白pSOCS1免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,经4次免疫,间接ELISA测得抗体效价达到1∶51 200。Western-blot和间接免疫荧光试验结果表明,该多克隆抗体可与pSOCS1重组蛋白和经HEK293T细胞过表达的pSOCS1蛋白发生特异性反应,证明pSOCS1重组蛋白免疫原性良好。本研究为后续制备单克隆抗体、研究猪SOCS1相关作用机制奠定了基础。

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