文献类型： 中文期刊
作者： 何辉 1 ; 乔绪稳 2 ; 陈瑾 2 ; 于晓明 2 ; 张元鹏 2 ; 侯继波 2 ; 郑其升 2 ; 孙卫东 1 ;
作者机构： 1.南京农业大学动物医学院
2.国家兽用生物制品工程技术研究中心
关键词： CSFV;荧光抗体;原核表达;直接免疫荧光
期刊名称： 南京农业大学学报
ISSN： 1000-2030
年卷期： 2017 年 40 卷 02 期
页码： 295-301
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： [目的]本文旨在研究大肠杆菌表达的猪瘟病毒(CSFV)荧光抗体用于病毒直接免疫荧光检测的可行性。[方法]在基因水平上对编码猪瘟病毒纳米抗体(VHH)与绿色荧光蛋白(EGFP)的融合基因进行密码子优化,优化后的融合基因插入p ET32a(+)载体并在大肠杆菌BL21(DE3)中融合表达。表达的融合蛋白经过SDS-PAGE、Western blot进行表达及可溶性鉴定。利用镍柱亲和层析获得纯化的重组蛋白,经浓缩后用于猪瘟病毒直接免疫荧光检测并与CSFV间接免疫荧光试验进行效果比较,将该荧光抗体孵育CSFV、伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)和猪圆环病毒2型(PCV-2)感染的PK15细胞从而鉴定荧光抗体的特异性。[结果]SDS-PAGE结果表明荧光抗体在大肠杆菌中实现部分可溶性表达。特异性试验结果表明,只有接种CSFV的PK15细胞组出现明显的绿色荧光,而其他组不出现或只出现少量非特异性荧光。与用商品化单抗建立的间接免疫荧光试验结果相比,该荧光抗体建立的直接免疫荧光方法具有更强的清晰度。[结论]猪瘟荧光抗体可在大肠杆菌中高效表达,纯化后的抗体具有良好的特异性,且该抗体具有生产操作简单、制备周期短和成本低等特点。
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