文献类型： 中文期刊
作者： 万春和 1 ; 刘明 2 ; 刘春国 3 ; 张云 4 ;
作者机构： 1.福建省农业科学院畜牧兽医研究所
2.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所
3.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室
4.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所生物技术国家重点实验室
关键词： H3亚型猪流感病毒;血凝素基因;昆虫细胞杆状病毒表达系统;间接酶联免疫吸附试验
期刊名称： 中国兽医科学
ISSN： 1673-4696
年卷期： 2010 年 03 期
页码： 252-257
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 根据GenBank上登录的H3亚型猪流感病毒HA基因序列设计了1对引物,经PCR扩增出HA基因目的片段,并将其克隆到pFastBacGP67C杆状病毒载体上,筛选阳性重组转座载体pFastBacGP67C-H3,转化至含有杆状病毒穿梭载体(bacmid)的DH10Bac感受态细胞,构建杆状病毒表达载体,获得重组转座子rBacmid-H3,在脂质体介导下转染处于对数生长期的sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒rBv-H3,将其感染sf9昆虫细胞,收获目的蛋白。经血凝试验、SDS-PAGE、Western-blot、免疫组织化学分析,结果表明,HA蛋白得到表达,且具有良好的免疫学活性。用表达的HA蛋白作为包被抗原,初步建立了H3亚型猪流感病毒的间接ELISA检测方法,通过对93份送检的疑似猪流感血清进行检测,结果显示,检出阳性率为46.24%。上述结果为建立快速、准确、简便的H3亚型猪流感鉴别诊断试剂盒奠定了基础。
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