文献类型： 中文期刊

作者： 云涛 ¹ ; 陈柳 ¹ ; 张存 ¹ ; 倪征 ¹ ; 华炯钢 ¹ ; 余斌 ¹ ; 叶伟成 ¹ ;

作者机构： 1.浙江省农业科学院畜牧兽医研究所

关键词： 鸭坦布苏病毒;全长cDNA克隆;感染性克隆

期刊名称： 浙江农业学报

ISSN： 1004-1524

年卷期： 2015 年 27 卷 11 期

页码： 1910-1915

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 根据鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)ZJ-407株全基因组序列设计并合成4对特异的Infusion引物,应用RT-PCR技术分4段扩增了DTMUV全基因组c DNA。通过In-fusion技术将扩增的c DNA重叠片段A,B,C和D片段分别克隆到载体p BluescriptⅡKS(+)中,获得了DTMUV全长基因组c DNA克隆p SK-T7-DTMUV。在扩增5'末端时,引入T7启动子序列;在基因组3'末段引入SmaⅠ酶切位点,以供c DNA模板的线性化之用。核酸序列分析表明,DTMUV毒株基因组全长为10 990个核苷酸,与DTMUV ZJ-407 DF-1细胞分离株的同源性为99.9%;全长基因组中有9个核苷酸发生突变,其中7处为沉默突变,2处导致相对应的氨基酸发生改变,且这两处均位于非结构蛋白NS5。结果表明,本研究成功构建了DTMUV ZJ-407株基因组全长c DNA,为其感染性c DNA的拯救奠定基础。