文献类型： 中文期刊

作者： 吴彩霞 ¹ ; 刘晓东 ² ; 池洪树 ² ; 谢岸桦 ² ; 陈秀霞 ² ; 许斌福 ² ; 郑在予 ² ; 潘滢 ² ; 龚晖 ² ;

作者机构： 1.福建农林大学海洋学院

2.福建省农业科学院生物技术研究所

关键词： 大黄鱼虹彩病毒;ORF 121R蛋白;蛋白表达;亚细胞定位

期刊名称： 福建农业学报

ISSN： 1008-0384

年卷期： 2025 年 40 卷 006 期

页码： 577-584

摘要： 【目的】解析大黄鱼虹彩病毒（large yellow croaker iridovirus, LYCIV）开放阅读框（Open reading frame,ORF） 121R蛋白的免疫原性与亚细胞定位，探究其在病毒致病机制中的潜在作用。【方法】以LYCIV ORF121R蛋白为研究对象，通过生物信息学分析手段，进行同源蛋白之间的序列对比，并预测其亚细胞定位；将目的基因通过同源重组方法分别克隆至pET32a及pEGFP-N1载体中，构建重组质粒ORF 121R-His和ORF 121R-EGFP；诱导表达并纯化ORF121R-His重组蛋白，将其免疫小鼠制备多克隆抗体，并通过ELISA、Western-blotting和细胞间接免疫荧光等手段评估抗体效价及特异性；以ORF 121R-EGFP质粒转染EPC细胞后，利用激光共聚焦显微镜观察ORF121R-EGFP的亚细胞定位。【结果】LYCIV ORF 121R蛋白与传染性脾肾坏死病毒（Infectious spleen and kidney necrosis virus, ISKNV）中具有高免疫原性的ORF 117R蛋白氨基酸序列一致性为79.96%，且预测定位于细胞质。orf121R全长1 377 bp，将其分别克隆至pET32a及pEGFP-N1载体中，成功构建重组质粒ORF 121R-His和ORF 121REGFP。经亲和纯化获得可溶性ORF 121R-His重组蛋白，其分子量为72.6 kDa，用该重组蛋白制备的多克隆抗体效价为1∶128 000，可特异性识别天然病毒蛋白；ORF 121R-EGFP在鲤上皮瘤（Epithelioma papulosum cyprini, EPC）细胞中呈现胞质特异性分布，荧光信号均匀富集于核周区域。【结论】LYCIV ORF 121R主要定位于细胞质中，该蛋白良好的免疫原性与特异性，使其成为潜在的疫苗候选抗原和诊断靶标，为开发针对LYCIV的特异性防控策略提供了新的可能性。