文献类型： 中文期刊
作者： 吴桐 1 ; 刘雯雯 1 ; 任红艳 1 ; 徐康 2 ; 于济世 3 ; 杨烨 4 ; 印遇龙 2 ; 毕延震 1 ;
作者机构： 1.湖北省农业科学院
2.岭南现代农业科学与技术广东省实验室
3.湖南惠生农业科技开发股份有限公司
4.长江大学动物科学技术学院
关键词： CRISPR/Cas9;tRNA;桃源黑猪;MSTN
期刊名称： 中国畜牧杂志
ISSN： 0258-7033
年卷期： 2025 年 61 卷 011 期
页码： 138-143
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 多位点基因编辑是通往复合性状协同改良的有效路径,它可以通过并联表达多个单顺反子单导向RNA(Single-guide RNA,sgRNA)和串联表达一个多顺反子sgRNA 2 种方法实现.前者元件构成复杂,牺牲了编辑效率;后者结构单一,效率优势明显.本研究利用转运RNA(tRNA)精确自剪切的优点,通过表达双顺反子sgRNA,定点编辑了猪肌抑素基因成熟肽编码区,获得了纯合敲除MSTN的猪原代肾成纤维细胞系,成功构建了基于tRNA串联双sgRNA的载体PX459-tRNA-MSTN,相较于单sgRNA介导及双sgRNA分别介导的方式,串联双sgRNA介导的敲除效率显著提高,并成功实现了MSTN基因的敲除,证实了tRNA自剪切机制在大型动物多基因编辑中的有效性和实用性,为地方猪种的经济性状遗传改良提供了简便、高效的技术方案,展现出在畜牧育种中推广应用的潜力.
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