文献类型： 中文期刊
作者： 余晓娇 1 ; 刘晓艳 2 ; 杨自文 1 ;
作者机构： 1.武汉大学生命科学学院
2.湖北省生物农药工程研究中心
关键词： 枯草芽胞杆菌;营养期杀虫蛋白(Vip);vip3Aa基因;克隆与表达
期刊名称： 农业生物技术学报
ISSN： 1674-7968
年卷期： 2015 年 23 卷 11 期
页码： 1465-1471
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 营养期杀虫蛋白3A(vegetative insecticidal protein 3A,Vip3A)对鳞翅目(Lepidoptera)害虫具有广谱杀虫活性,具有重要研究意义。本研究以对玉米螟(Ostrinia nubilalis)具有高毒力的野生型苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringienesis,Bt)NBIC-380菌株总DNA为模板,PCR扩增vip3Aa(Gen Bank登录号:KT307982)全长基因约2.4 kb。将vip3Aa基因插入大肠杆菌(Escherichia coli)表达载体p GEX-6p-1和p ET-28a以及Bt表达载体p BMB1A中,构建重组表达载体p GV3、p EV3和p BV3。将p GV3和p EV3转化大肠杆菌BL21(DE3),p BV3转化Bt BMB171和枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis,Bs)168菌株。十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gelelectrophoresis,SDS-PAGE)分析表明,vip3Aa基因在BL21(DE3)、Bt BMB171和Bs168中均有表达,蛋白质相对分子质量为88 k D。纯化后的蛋白及Bt中表达的蛋白对棉铃虫(Helicoverpa armigera)二龄幼虫进行了生物测定,在大肠杆菌表达的蛋白没有杀虫活性,而在芽胞杆菌中表达的蛋白有杀虫活性,半数致死浓度(medium lethal concentration,LC50)值分别为6.185 6(Bt BMB171)和2.984 6 mg/m L(Bs168)。生测结果表明,Bt NBIC-380菌株的vip3Aa基因表达的蛋白对棉龄虫具有一定杀虫活性。本研究为丰富Vip的基础研究和构建高效广谱的工程菌提供基础资料。
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