文献类型： 中文期刊

作者： 刘聪 ¹ ; 付小哲 ² ; 林强 ² ; 牛银杰 ² ; 罗霞 ² ; 梁红茹 ² ; 马宝福 ² ; 李宁求 ² ;

作者机构： 1.上海海洋大学水产与生命学院

2.中国水产科学研究院珠江水产研究所/农业农村部渔用药物创制重点实验室/广东省水产动物免疫技术与绿色养殖重点实验室

关键词： 大口黑鲈;蛙虹彩病毒;同步接种病毒;异步接种病毒

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2024 年 46 卷 010 期

页码： 1026-1033

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为优化大口黑鲈蛙虹彩病毒（LMBV）在细胞中的最佳增殖条件，本研究通过测定鳜脑组织细胞系（CPB）和鲤鱼上皮瘤（EPC）细胞系的生长曲线后，分别以不同MOI（1、0.1、0.01）LMBV感染不同初始细胞数量的CPB细胞（2.5×10～5个/mL、4×10～5个/mL、5×10～5个/mL，根据细胞生长曲线确定为对数生长期及接近该期的细胞数量，后同）和EPC细胞（1×10～6个/mL、2×10～6个/mL、3×10～6个/mL）,28℃培养至细胞完全病变，采用荧光定量PCR（qPCR）和Muench-Reed法分别测定病毒拷贝数和病毒滴度(TCID₅₀)。结果显示，以MOI 0.1的LMBV感染4×10～5个/mL CPB细胞时病毒产量最高，此时病毒拷贝数为10^7.4拷贝/μL，病毒滴度为10^8.75TCID₅₀/mL；以MOI 0.1的LMBV感染1×10～6个/mL EPC细胞时病毒产量最高，此时病毒拷贝数为10^5.8拷贝/μL，病毒滴度为10^5.54TCID₅₀/mL。表明CPB细胞更适合LMBV的增殖。为进一步筛选LMBV在CPB细胞中的最佳增殖条件，分别采用异步法接种病毒（初始CPB细胞数量分别为2.5×10～5个/mL、4×10～5个/mL及5×10～5个/mL,LMBV的MOI分别为1、0.1及0.01）和同步接种病毒（初始CPB细胞数量分别为2.5×10～5个/mL、4×10～5个/mL及5×10～5个/mL,FBS含量分别为4%、6%、8%及10%,LMBV的MOI分别为1、0.1及0.01）,28℃培养至各组细胞完全病变后，分别采用上述qPCR和Muench-Reed法测定各组细胞中的病毒拷贝数和病毒滴度，比较两种接种方式LMBV的最佳增殖条件。结果显示，采用异步接种病毒时，当初始CPB细胞的数量为4×10～5个/mL、MOI为0.1时LMBV拷贝数和病毒滴度均最高，分别为10^7.18拷贝/μL和10^8.22TCID₅₀/mL；采用同步接种病毒时，当初始CPB细胞的数量为4×10～5个/mL、FBS含量为8%、MOI为0.1时获得的LMBV拷贝数和滴度均最高，分别为10^7.54拷贝/μL和10^8.67TCID₅₀/mL。上述结果表明，当初始CPB细胞数量为4×10～5个/mL、FBS含量为8%、LMBV的MOI为0.1，并且采用同步接种病毒的方式是LMBV在CPB细胞中的最佳增殖条件。综上，本研究首次筛选到LMBV的易感细胞系，确定了LMBV在CPB细胞中的最佳增殖条件，为LMBV的大量生产及疫苗的研发提供了数据参考及技术指导。