文献类型： 中文期刊

作者： 常新见 ¹ ; 周金柱 ¹ ; 范宝超 ¹ ; 郭容利 ¹ ; 朱琳 ¹ ; 赵永祥 ¹ ; 牛家强 ² ; 何孔旺 ¹ ; 李彬 ¹ ;

作者机构： 1. 江苏省农业科学院兽医研究所

2. 西藏农牧学院动物科学学院

关键词： 猪轮状病毒;VP8基因;蛋白纯化;原核表达

期刊名称： 畜牧与兽医

ISSN： 0529-5130

年卷期： 2020 年 010 期

页码： 68-72

收录情况： 北大核心

摘要： 为深入研究猪轮状病毒VP8蛋白的结构和功能,以及研制新型猪轮状病毒疫苗,利用生物信息学软件DNAStar对本研究室保存的1株A组G9P7型猪轮状病毒NJ2012的VP8基因序列进行核苷酸和氨基酸同源性分析;设计并合成1对引物,采用RT-PCR方法扩增VP8蛋白编码基因,用限制性核酸内切酶对目的片段与pET28a(+)原核表达载体进行双酶切,构建了重组原核表达载体,用IPTG诱导表达,并进行Western blot验证.结果显示:NJ2012毒株的VP8基因序列与参考毒株序列的核苷酸同源性为53.9%~99.2%,氨基酸同源性为42.1%~97.5%;VP8基因克隆成功,经测序与目的基因完全一致;经鉴定,构建的重组原核表达质粒pET28a-VP8能够在DE3宿主菌中表达,该蛋白以包涵体形式存在;Western blot结果显示该蛋白可与抗His-tag鼠单克隆抗体发生特异性反应.本研究实现了VP8蛋白在原核系统中稳定表达,为调查该蛋白的免疫原性及研制安全、高效的猪轮状病毒亚单位疫苗提供了参考.