文献类型： 中文期刊

作者： 林湛松 ¹ ; 王健华 ¹ ; 张雨良 ¹ ; 江林 ¹ ; 杨文君 ¹ ; 余乃通 ¹ ; 刘志昕 ¹ ;

作者机构： 1.中国热带农业科学院热带生物技术研究所

关键词： 香蕉条斑病毒;原核表达;细菌双杂交;Western blotting;自激活鉴定

期刊名称： 基因组学与应用生物学

ISSN： 1674-568X

年卷期： 2010 年 29 卷 06 期

页码： 1072-1077

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目前,香蕉条斑病毒所有3个ORF表达产物功能均不明确,通过双杂技术研究病毒未知蛋白与宿主蛋白的互作,可以初步推断未知蛋白的功能。本实验旨在构建香蕉条斑病毒ORFⅠ和ORFⅡ在细菌双杂系统中的诱饵质粒。首先以课题组保存的连接有香蕉条斑病毒河口分离物全基因组的pMD-18T载体DNA为模板,经过PCR扩增,切胶回收,并通过与带有λcI基因的pBT载体共同双酶切及T4连接酶连接后,得到与λcI基因融合表达的重组载体pBT-ORF1和pBT-ORF2。转化大肠杆菌XL1-BlueMRF'报告菌株,用IPTG(0.1mmol/L)诱导目的基因片段表达。Westernblotting结果表明,ORF1-λcI和ORF1-λcI两种融合蛋白均成功表达,且大小与预期一致。之后,pBT-ORF1及pBT-ORF2分别与空质粒pTRG共转化XL1-BlueMRF'报告菌株,pBT空质粒和pTRG-Gal11p共转化作为阴性对照。结果显示pBT-ORF1及pBT-ORF2均无自激活现象,可以进行后续的细菌双杂工作。本实验为BSV与宿主的细菌双杂系统的建立及蛋白组学的研究奠定了基础。