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创伤弧菌铁调基因fur的原核表达及多克隆抗体制备

文献类型： 中文期刊

作者： 李素一 1 ; 张丽娟 1 ; 陈华 1 ; 柯翎 1 ; 陈叙 1 ; 林晨韬 1 ;

作者机构： 1.福建省农业科学院生物技术研究所

关键词： 创伤弧菌;铁调基因fur;克隆;原核表达;多克隆抗体

期刊名称： 福建农业学报

ISSN： 1008-0384

年卷期： 2016 年 31 卷 09 期

页码： 912-916

收录情况： 北大核心

摘要： 应用PCR方法克隆了创伤弧菌Vibrio vulnificus FJ03-X2株的铁调基因fur(Ferric uptake regulator),该基因片段大小为450bp,编码149个氨基酸;以pET32a为表达载体,构建了原核表达质粒pET32a-FUR,表达质粒测序结果表明目的基因与GenBank中报道的创伤弧菌fur基因的同源性达98%以上;诱导表达获得可溶性的重组表达蛋白rFUR。镍离子金属螯合亲和层析介质(Ni-NTA)纯化rFUR,SDS-PAGE电泳分析其分子量约33kD。以纯化后的融合蛋白rFUR为抗原,4次免疫SD大鼠,制备抗rFUR蛋白大鼠多克隆抗体。用ELISA方法检测鼠多克隆抗体的效价达到1∶256 000,表明融合蛋白rFUR具有良好的免疫原性。

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