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鲤疱疹病毒2型和3型双重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立与应用

文献类型: 中文期刊

作者: 陈永聪 1 ; 方勤美 1 ; 柯翎 1 ; 施少华 1 ;

作者机构: 1.福建省农业科学院生物技术研究所

关键词: 鲤疱疹病毒2型;鲤疱疹病毒3型;双重TaqMan qPCR

期刊名称: 海洋渔业

ISSN: 1004-2490

年卷期: 2025 年 47 卷 005 期

页码: 619-628

收录情况: 北大核心 ; CSCD

摘要: 为快速、高效鉴别鲤疱疹病毒2型(cyprinid herpesvirus 2,CyHV-2)和3型(cyprinid herpesvirus 3,CyHV-3),针对鲤疱疹病毒基因组的保守序列,设计了2对特异性引物,通过优化反应条件,建立了检测CyHV-2和CyHV-3的双重TaqMan qPCR方法,并对该方法特异性、灵敏度和重复性进行了评价。同时利用该方法对实验室保存的金鱼(Carassius auratus var.)和锦鲤(Cryprinus carpiod haematopterus)临床样品进行检测。结果显示,该方法能特异性检测CyHV-2和CyHV-3,而对水产养殖中其他常见DNA或RNA病毒无交叉反应;敏感性实验显示,该方法的最低检测量为10 copies·μL-1,表明该方法具有较高的灵敏度;测定结果在组内和组间重复变异系数均小于3%,重复性良好。使用该方法对实验室保存的37份金鱼和78份锦鲤临床样品进行检测,病毒检出结果与用国家标准(GB/T 36194-2018)和行业标准(SC/T 7212.1-2011)方法检测的结果一致。对5份CyHV-2(金鱼样品)和5份CyHV-3(锦鲤样品)阳性的临床样品进行混合后检测,结果均为CyHV-2和CyHV-3双阳性。研究表明,本研究建立的双重TaqMan qPCR检测方法具有特异性强、灵敏度高和重复性好等优点,可以为临床上CyHV-2和CyHV-3的快速定量检测和鉴别诊断提供新的工具和方法。

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