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大黄鱼微卫星标记的富集与筛选

文献类型： 中文期刊

作者： 郝君 1 ; 孙效文 1 ; 梁利群 1 ; 鲁翠云 1 ;

作者机构： 1.中国水产科学研究院黑龙江水产研究所农业部北方鱼类基因工程育种试验室

关键词： 大黄鱼;微卫星;磁珠;生物素

期刊名称： 中国水产科学

ISSN： 1005-8737

年卷期： 2006 年 13 卷 05 期

页码： 762-766

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 根据生物素与链霉亲和素的亲和原理,采用生物素-磁珠富集微卫星,与传统放射性同位素杂交法相结合,构建筛选大黄鱼的微卫星文库。用生物素-微卫星捕捉单链限制性酶切片段(含有接头和大黄鱼微卫星序列),经PCR扩增单链目的片段形成双链,然后连接至T载体上,转化感受态细胞。将移至硝酸纤维素膜的重组菌用32P标记的放射性同位素探针5′-[γ-32PATP(CA)15筛选出阳性克隆菌。测序结果发现,阳性克隆率为71.9%,105个微卫星位点。其中选取设计合成30对并筛选出22对可用引物。说明所建大黄鱼微卫星文库是一个高质量的文库,可为大黄鱼基因组结构分析、大黄鱼精密微卫星连锁图谱构建、分子进化和系统发育研究、分子标记辅助育种以及经济性状的QTL定位提供大量的微卫星标记。

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