文献类型： 中文期刊
作者： 焦文强 1 ; 邢广旭 2 ; 刘运超 2 ; 徐引弟 1 ; 王治方 1 ; 王克领 1 ;
作者机构： 1.河南省农业科学院畜牧兽医研究所
2.河南省农业科学院
关键词： 猪流行性腹泻病毒;非结构蛋白;载体构建;真核表达;免疫印迹
期刊名称： 黑龙江畜牧兽医(下半月)
ISSN： 1004-7034
年卷期： 2020 年 008 期
页码： 60-64
收录情况： 北大核心
摘要： 为了对猪流行性腹泻病毒(PEDV)非结构蛋白进行真核表达载体的构建和表达,进一步研究非结构蛋白与宿主细胞蛋白互作,试验以PEDV-Hubei-2016株为基础,以真核表达质粒pCDNA3.1为载体,根据PEDV非结构蛋白在基因组的位置克隆8个非结构蛋白(NSP1、NSP4、NSP5、NSP6、NSP7、NSP8、NSP9、NSP10)基因,通过在引物添加Xho Ⅰ和BamH Ⅰ酶切位点将目的基因连接到pCD-NA3.1载体,酶切和测序验证插入序列.将构建正确的载体转染HEK-293细胞,24 h后收取细胞进行Western-blot检测.结果 表明:本试验成功扩增了NSP1、NSP4、NSP5、NSP6、NSP7、NSP8、NSP9、NSP10蛋白的基因,连接质粒,酶切、测序验证序列正确.将构建正确的质粒转染HEK-293细胞,24 h后收取细胞,Western-blot检测结果表明,NSP1、NSP4、NSP5、NSP6、NSP7、NSP8、NSP9、NSP10蛋白出现与预期大小一致的条带.说明本试验构建的8个真核表达质粒在HEK-293细胞中成功表达.
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