文献类型： 中文期刊

作者： 刘理想 ¹ ; 高一 ² ; 吕阳 ¹ ; 薛佳佳 ¹ ; 胡忠昌 ² ; 张国梁 ³ ;

作者机构： 1.吉林农业大学动物科学技术学院

2.吉林省农业科学院畜牧科学分院

3.吉林省农业科学院畜牧分院

关键词： 草原红牛;Acot2基因;克隆;生物信息学分析;表达差异

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2019 年 011 期

页码： 3154-3162

收录情况： 北大核心

摘要： 本研究旨在探究草原红牛酰基辅酶A硫酯酶2(Acot2)的基因功能,并对其进行生物信息学分析,检测Acot2基因在草原红牛不同组织中的表达差异.根据GenBank中公布的牛Acot2基因序列(登录号:NM001101938.1)设计引物,PCR扩增获得草原红牛Acot2基因的完整CDS并进行测序,利用分析软件进行序列同源性比对并构建系统进化树;获得对应的氨基酸序列并分析蛋白理化特性及蛋白亚细胞结构、亲疏水性和磷酸化位点,预测蛋白二级结构并构建蛋白质三级结构模型;利用实时荧光定量PCR方法检测Acot2基因在不同组织中的表达差异.结果显示,草原红牛Acot2基因CDS大小为1 395 bp,编码464个氨基酸,其核苷酸序列与亚洲水牛的同源性较高(98.3%),与猕猴和黑猩猩的同源性较低(80.5%和80.4%).Acot2蛋白分子式为C2317H3606N640O628S14,分子质量为50.924 ku,理论等电点为8.84.蛋白质不稳定指数为37.50,氨基酸残基多数为亲水性残基,总平均亲水性为-0.094.亚细胞定位分析表明,Acot2蛋白分布在内质网(30.4%)、线粒体(26.1%)、高尔基体(17.4%)、细胞质(17.4%)、液泡(4.3%)和细胞质(4.3%)中;磷酸化位点分析发现,Acot2蛋白存在20个磷酸化位点.二级结构主要形式有α-螺旋(21.8%)、β-转角(33.4%)、β-折叠(18.4%)和无规则卷曲(26.4%),三级结构预测结果与其相一致.实时荧光定量结果显示,Acot2基因在草原红牛胃中表达量最高,在肺脏中表达量极少.Acot2基因在生物进化过程中具有低保守性,其编码氨基酸组成的蛋白质结构稳定,属于水溶性蛋白,在线粒体和内质网中发挥作用,在草原红牛不同组织的表达量有明显差异.本研究结果为进一步探究Acot2基因对家畜脂代谢的影响和筛选草原红牛肉质候选基因提供资料.