文献类型： 中文期刊

作者： 宋天增 ¹ ; 冯静 ² ; 曾宪垠 ² ; 杨剑波 ² ; 杨华 ² ; 张红琳 ² ; 杨井泉 ² ; 韩猛立 ² ; 贾斌 ² ; 赵宗胜 ² ; 石国庆 ² ;

作者机构： 1.石河子大学动物科技学院

2.石河子大学动物科技学院;新疆农垦科学院畜牧兽医研究所;四川省甘孜藏族自治州畜牧业科学研究所;四川农业大学原子能农业应用研究室;南京晓庄学院生命科学系

关键词： 打点注射;睾丸注射;卵巢注射;转基因兔

期刊名称： 西南农业学报

ISSN： 1001-4829

年卷期： 2010 年 23 卷 06 期

页码： 2059-2065

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为探讨直接用注射器对睾丸和卵巢打点注射pIRES2-EGFP质粒转染兔的精子细胞和卵母细胞,建立操作方便、效率高、成本低、可批量生产转基因兔的可行性。选择5只成年新西兰雄兔、29只经产新西兰雌兔,每侧睾丸和卵巢内分别打点注射0.5~0.8 mg/mL质粒0.25 mL。①第3周随机取一只雄兔睾丸做冰冻切片,于荧光显微镜下观察转染情况。②(Ⅰ:1#♂×7♀、Ⅱ:2#♂×7♀、Ⅲ:3#♂×7♀、Ⅳ:4#♂×7♀)其它雄兔于第6周和第7周与3日前做过卵巢注射并超排处理的雌兔配种,最后采集新生仔兔耳组织,提取基因组DNA,经PCR和Southern杂交检测阳性率。结果显示雄兔睾丸冰冻切片于荧光显微镜下可见绿色荧光,统计所得后代转基因阳性率,并进行差异分析,其中Ⅰ组后代阳性率最高,PCR和Southern杂交检测阳性率为93.55%和83.87%,Ⅳ后代阳性率最低,依次为80.65%和70.97%,但是各组之间差异不显著。上述实验结果表明,对睾丸和卵巢同时注射外源基因可获得较高阳性率的转基因后代,生产转基因的方法操作简便、高效,为日后大规模制备一些大型家畜的转基因后代奠定了基础。