文献类型： 中文期刊

作者： 陈丽 ¹ ; 倪敏舒 ² ; 徐悦 ² ; 鲍熹 ² ; 庄腾寒 ² ; 冯磊 ² ; 郭美锦 ³ ;

作者机构： 1.华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室

2.江苏省农业科学院动物免疫工程研究所

3.生物反应器工程国家重点实验室

关键词： 伪狂犬病毒;BHK-21悬浮细胞;内质网应激;未折叠蛋白反应

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2022 年 49 卷 008 期

页码： 3235-3244

收录情况： 北大核心

摘要： [目的]探讨伪狂犬病毒(PRV)感染对BHK-21悬浮细胞内质网应激及未折叠蛋白反应(UPR)的影响.[方法]将悬浮的乳仓鼠肾细胞(BHK-21)以感染复数(MOI)0.01接种PRV,分别在接毒后12、24、36、48和56 h取样,用CCK-8法检测细胞存活率,按Reed-Muench法检测病毒滴度,筛选病毒接种处理的合适时间;以不接毒细胞作对照组,分别在感染后12、24、36和48 h取样,用实时荧光定量PCR法检测内质网应激标志分子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)及UPR的3种感受蛋白(PERK、IRE1、ATF6)相关通路中基因的表达变化,Western blotting法检测相关蛋白的表达变化.在接种PRV同时分别加入0、0.001、0.005、0.01和0.02 μmol/L内质网应激诱导剂毒胡萝卜素(Tg)和0、20、40、80和160 μmol/L内质网应激抑制剂牛磺熊去氧胆酸(TUDCA),48 h收集细胞测定病毒滴度和细胞存活率.[结果]PRV感染56 h细胞存活率低于70%,感染48 h时病毒滴度达到最高(8.1 1g TCID50/mL),因此后续试验分别在接毒后12、24、36和48 h取样.与对照组相比,PRV感染36和48 h GRP78转录水平均极显著升高(P<0.01);PERK通路中,转录激活因子4(ATF4)转录水平在PRV感染36、48 h均极显著升高(P<0.01),生长抑制DNA损伤基因34(GADD34)转录水平在PRV感染36 h显著升高(P<0.05)、48 h极显著升高(P<0.01),磷酸化真核翻译起始因子(P-eIF2α)蛋白水平在PRV感染36、48 h均极显著升高(P<0.01);IRE1通路中,PRV感染组细胞36 h后多以剪切形式sXBP1存在,同时下游p58IPK mRNA水平在36 h显著增加(P<0.05),p58IPK和 EDEM mRNA水平在48 h均极显著增加(P<0.01);ATF6通路中,PRV感染不同时间ERp57、PDI、Calnexin和Calreticulin的表达均无显著变化(P>0.05).与0 μmol/L组相比,0.01和0.02 μmol/L Tg极显著降低细胞存活率(P<0.01),0.005和0.01 μmol/L Tg均极显著增加了 PRV病毒滴度(P<0.01).[结论]PRV感染可以诱导BHK-21悬浮细胞内质网应激,激活UPR的PERK和IRE1信号通路,说明PRV利用内质网应激增强其复制.