文献类型： 中文期刊

作者： 恽君雯 ¹ ; 陈丽 ¹ ; 徐悦 ¹ ; 鲍熹 ¹ ; 冯磊 ¹ ; 高崧 ¹ ;

作者机构： 1.江苏省生产力促进中心;扬州大学兽医学院;江苏省农业科学院动物免疫工程研究所;江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心;江苏大学药学院

关键词： 免疫应答;DF-1细胞;禽腺病毒4型;CRISPR/Cas9;Toll样受体7

期刊名称： 畜牧与兽医

ISSN： 0529-5130

年卷期： 2023 年 55 卷 002 期

页码： 80-90

收录情况： 北大核心

摘要： 旨在构建高质量的禽源细胞系,应用CRISPR/Cas9技术实现鸡胚成纤维细胞(DF-1)的Toll样受体7(TLR7)编码基因的敲除,构建稳定的细胞培养禽腺病毒4型(FAdV-4)增殖体系.采用荧光定量PCR的方法对FAdV-4感染DF-1细胞后先天性免疫信号通路中效应分子进行检测,选择转录水平显著上调的基因TLR7作为研究对象;构建sgRNA载体与Cas9表达载体共转染DF-1细胞,经绿色荧光蛋白(GFP)阳性特征分选单克隆,PCR验证及增毒试验筛选后获得TLR7编码序列敲除的DF-1-TLR7-KO#3单克隆细胞系,命名为DF-1-TLR7-KO细胞.对敲除前后DF-1细胞的天然免疫系统对FAdV-4感染的拮抗效应和病毒在不同细胞中增殖效率的差异进行了研究.结果表明:成功构建的TLR7编码序列敲除的DF-1细胞系,与原始细胞相比病毒增殖能力提高.试验对细胞的天然免疫系统与FAdV-4感染的互作机理进行了初步探索,为更好地研究宿主对病毒入侵的应答机制,提高疫苗生产效能提供了研究基础和生物材料储备.