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向日葵单染色体显微分离及特异文库的构建

文献类型： 中文期刊

作者： 孙瑞芬 1 ; 闫素丽 2 ; 安玉麟 2 ;

作者机构： 1.内蒙古农牧业科学院生物技术研究中心

2.内蒙古农牧业科学院生物技术研究中心;内蒙古农业大学农学院

关键词： 向日葵;染色体;显微分离;PCR扩增;单染色体文库

期刊名称： 中国细胞生物学学报

ISSN： 1674-7666

年卷期： 2014 年 01 期

页码： 33-38

收录情况： CSCD

摘要： 采用玻璃针分离法,通过显微操作系统成功地分离到内葵杂3号三交种和单交种的随体染色体,经两轮LA-PCR扩增得到250~1 500 bp的DNA片段。用各自的基因组DNA标记成探针,与随体染色体扩增产物进行Southern杂交,显示杂交信号,证明内葵杂3号三交种和单交种随体染色体DNA已被成功扩增。将第2轮PCR产物构建质粒文库,得到三交种和单交种克隆数分别约为2.26×105和2.57×105。各随机挑取30个重组子进行分析,发现插入片段大小分别为200~700 bp和200~500 bp,平均插入片段大小分别为535 bp和480 bp。这是染色体微分离与微克隆技术首次在向日葵上的应用。

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