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兔肾上皮细胞cDNA表达文库的建立

文献类型： 中文期刊

作者： 宋毅 1 ; 陈柳 2 ; 余斌 2 ; 倪征 2 ; 云涛 2 ; 刘光清 3 ;

作者机构： 1.浙江师范大学

2.浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所

3.中国农业科学院上海兽医研究所

关键词： 兔肾上皮细胞细胞;RK13;cDNA文库;库容量

期刊名称： 中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2010 年 18 卷 02 期

页码： 23-27

摘要： 为筛选兔瘟病毒在兔肾上皮细胞(rabbit kidney epithelial cells,RK13)上的受体,从RK13细胞中提取基因组总RNA,然后用链霉亲和素磁珠(SA-PMP)纯化mRNA,再用SMART(Switching methanism at 5 end ofRNA transcript)技术合成cDNA第1链。采用长距离PCR(long-distance-PCR,LD-PCR)方法扩增双链cDNA,经纯化后克隆到真核表达载体pEXP-Lib中。最后,电转化宿主菌(DH5α),构建了RK13细胞的全长cDNA真核表达文库。鉴定结果表明,该文库插入的cDNA片段平均长度达到1.0 kb,库容量达到2.55×105CFU。

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